Tại sao vấn đề tách và làm thuần khiết enzym gặp nhiều khó khăn?

Để loại bỏ protein tạp trong dịch chiết enzyme, có nhiều phương pháp khác nhau được sử dụng, tùy thuộc vào tính chất của protein tạp và enzyme mục tiêu. Các phương pháp bao gồm:

• Phương pháp biến tính chọn lọc: Sử dụng các tác nhân như nhiệt độ, pH, hoặc hóa chất để làm biến tính và kết tủa protein tạp, trong khi vẫn giữ enzyme mục tiêu hoạt tính.


• Phương pháp kết tủa phân đoạn: Sử dụng các chất kết tủa như muối (ví dụ: ammonium sulfate) hoặc dung môi hữu cơ (ví dụ: ethanol) để kết tủa protein dựa trên độ tan khác nhau của chúng. Kết tủa protein tạp trước, sau đó loại bỏ.


• Phương pháp lọc gel (Gel filtration chromatography): Sử dụng vật liệu gel có kích thước lỗ khác nhau để tách protein dựa trên kích thước. Các protein lớn hơn sẽ đi qua nhanh hơn, còn protein nhỏ hơn sẽ bị giữ lại lâu hơn. Tuy nhiên, phương pháp này thường dùng để tinh sạch hơn là loại bỏ hoàn toàn protein tạp.


• Phương pháp sắc ký (Chromatography): Bao gồm nhiều loại sắc ký khác nhau như sắc ký trao đổi ion, sắc ký ái lực, sắc ký hydrophobic, được sử dụng để tách protein dựa trên các đặc tính khác nhau của chúng như điện tích, khả năng liên kết đặc hiệu, hoặc tính kỵ nước.


• Điện di (Electrophoresis): Sử dụng điện trường để tách protein dựa trên điện tích và kích thước của chúng.

Do đó, phương án "Kết hợp tất cả các phương pháp trên" là đáp án chính xác nhất, vì trong thực tế, để loại bỏ protein tạp hiệu quả, người ta thường kết hợp nhiều phương pháp khác nhau.