Thứ tự các bước tinh chế kháng thể đơn dòng từ dịch cổ trướng

Quy trình tinh chế kháng thể đơn dòng (mAb) từ nuôi cấy tế bào thường bao gồm các bước sau:

1. Làm trong (Clarification): Loại bỏ các tế bào, mảnh vụn tế bào và các hạt lơ lửng khác từ dịch nuôi cấy. Điều này thường được thực hiện bằng ly tâm hoặc lọc.


2. Cô đặc (Concentration): Tăng nồng độ kháng thể trong dung dịch. Quá trình này thường sử dụng siêu lọc hoặc kết tủa.


3. Sắc ký ái lực (Affinity Chromatography) - Cột protein A: Protein A có ái lực cao với vùng Fc của kháng thể IgG. Do đó, cột protein A được sử dụng để thu giữ và tinh sạch kháng thể IgG một cách chọn lọc.


4. Sắc ký trao đổi ion (Ion Exchange Chromatography): Sử dụng các hạt mang điện tích để tách các protein dựa trên điện tích bề mặt của chúng. Bước này giúp loại bỏ các tạp chất còn lại và các biến thể của kháng thể.

Như vậy, thứ tự đúng của các bước là: Làm trong → Cô đặc → Cột protein A → Cột trao đổi ion.

Trong quy trình Cohn-Oncley, immunoglobulin (IgG) được thu chủ yếu từ tủa phân đoạn II. Quy trình này sử dụng các điều kiện pH và nồng độ ethanol khác nhau để kết tủa chọn lọc các protein huyết tương. Phân đoạn II chứa nồng độ IgG cao nhất sau khi loại bỏ các protein khác trong các phân đoạn trước đó.

Trong các phương pháp khuếch đại gen:

• PCR (Phản ứng chuỗi polymerase): Sử dụng 2 đoạn mồi đặc hiệu, một xuôi và một ngược, để khuếch đại một vùng DNA mục tiêu.


• LCR (Phản ứng nối ligase): Sử dụng nhiều cặp mồi (oligonucleotide) hơn so với PCR. Các mồi này liên kết cạnh nhau trên sợi khuôn, sau đó được nối lại với nhau bởi enzyme ligase. Do đó, LCR đòi hỏi số lượng mồi nhiều hơn đáng kể so với PCR.


• CPR (Cyclic Probe Reaction): Sử dụng một đoạn mồi duy nhất được thiết kế để lặp đi lặp lại quá trình lai và cắt để khuếch đại tín hiệu.

Như vậy, so sánh về số lượng đoạn mồi:

• Ít nhất: CPR (1 đoạn mồi)


• Nhiều nhất: LCR (nhiều cặp mồi)

=> Đáp án đúng là: CPR, LCR