Xử lý E. coli với CaCl₂ lạnh rồi trộn với AND và cho sốc nhiệt ở 42°C là phương pháp:

Câu hỏi này kiểm tra kiến thức về các kỹ thuật khuếch đại nucleic acid. Trong các phương án được đưa ra, chỉ có kỹ thuật LCR (Ligase Chain Reaction) là có tính chu kỳ nhiệt (thermal cycling). Các kỹ thuật còn lại (TMA, SDA, QRA) là các kỹ thuật khuếch đại đẳng nhiệt (isothermal amplification), không yêu cầu thay đổi nhiệt độ theo chu kỳ.

Kỹ thuật LCR (Ligase Chain Reaction) là một kỹ thuật nhân bản DNA dựa trên enzyme ADN ligase. Enzyme ADN ligase có chức năng nối các đoạn DNA lại với nhau. Trong kỹ thuật LCR, ADN ligase được sử dụng để nối các đoạn oligonucleotide lại với nhau khi chúng bắt cặp hoàn hảo với khuôn DNA.

Trong các phương án được đưa ra:

• PCR (Phản ứng chuỗi polymerase): Là kỹ thuật nhân bản DNA, được sử dụng rộng rãi trong nhiều ứng dụng khác nhau, bao gồm phát hiện sự hiện diện của một đoạn DNA cụ thể, khuếch đại DNA để giải trình tự, và phân tích biểu hiện gen. Tuy nhiên, PCR không phải là phương pháp chính để xác định trực tiếp điểm đột biến trong trình tự đích.
• LCR (Phản ứng chuỗi ligase): Là một kỹ thuật khuếch đại gen sử dụng DNA ligase để nối các oligonucleotide (đoạn DNA ngắn) lại với nhau khi chúng lai hoàn toàn khớp với trình tự đích. LCR có độ đặc hiệu cao và rất hữu ích trong việc phát hiện các đột biến điểm hoặc các biến thể trình tự nhỏ. Nếu có đột biến tại vị trí lai, các oligonucleotide sẽ không liên kết được với nhau một cách hiệu quả, do đó có thể phát hiện ra điểm đột biến.
• TMA (Phiên mã trung gian khuếch đại): Là một kỹ thuật khuếch đại RNA sử dụng enzyme phiên mã ngược và RNA polymerase. TMA chủ yếu được sử dụng để khuếch đại RNA hơn là DNA, do đó không phải là lựa chọn tốt nhất để xác định điểm đột biến trong trình tự DNA đích.
• CPR (Phản ứng cộng hưởng): Không phải là một kỹ thuật phổ biến hoặc được công nhận rộng rãi trong sinh học phân tử hoặc di truyền học.

Như vậy, LCR (Phản ứng chuỗi ligase) là phương pháp hữu ích nhất để xác định điểm đột biến trong trình tự đích nhờ độ đặc hiệu cao và khả năng phân biệt các trình tự DNA có sự khác biệt nhỏ.